新品 | 快速免洗型生化检测分析Fcγ受体与抗体亲和力

133 人阅读发布时间：2025-09-18 13:35

高通量免洗 FcγR-抗体 结合检测

治疗性抗体候选分子筛选 Lot Release（批放行）

完成检测约1小时或更短

Lumit^® FcγR Binding Immunoassays

单克隆抗体疗法已经彻底改变了广泛的癌症和自身免疫疾病治疗的格局。这些免疫调节分子通过多种机制发挥作用，其中最重要的一种机制是通过抗体与 Fc 受体的相互作用实现。

当抗体 Fc 结构域与免疫效应细胞 ( 如天然杀伤细胞和巨噬细胞 ) 上的 Fcγ 受体相互作用时，该效应功能被触发。多种因素都会影响 Fc 结构域和 Fcγ 受体的相互作用，对这些相互作用进行仔细的优化和监测对维持抗体药物的有效性和安全性十分必要。

Promega开发了一种易于使用的、可靠的、高通量的筛选方法，用来检测和比较 Fcγ 受体对 IgG Fc 结构域的亲和力。将在抗体开发、生产和加工过程中发挥重要的作用。

可检测的受体包括：

Lumit^® FcγRI Binding Immunoassay
Lumit^® FcγRIIA(H131) Binding Immunoassay
Lumit^® FcγRIIA(R131) Binding Immunoassay
Lumit^® FcγRIIIA(V158) Binding Immunoassay
Lumit^® FcγRIIIA(F158) Binding Immunoassay
Lumit^® FcγRllb Binding lmmunoassay

技术应用及优势

技术应用：

分析抗体—Fc 受体相互作用
确定单克隆抗体及其效应机制的血清半衰期
高通量筛选 Fc 工程化抗体库

技术优势：

无需洗涤或转移步骤，简单的添加-混合-读数
均质型检测，简单快速 (1小时内获得结果)
高灵敏度的生物发光读出结果
生物发光检测提供了广泛的检测窗口
检测只需要简单的化学发光检测仪
检测兼容 384孔板模式

原理及实验流程

Lumit^® FcγR Binding Immunoassays 是基于 NanoBiT^® 蛋白互补技术的竞争性结合免疫检测。该检测方法使用 LgBiT 标记的人IgG1 作为示踪剂 (Tracer-LgBiT) ，以 C 末端生物素化的人 FcγR 结合链霉亲和素 -SmBiT 为靶点 (FcγR-Biotin-SA -SmBiT) 。在没有抗体分析物样品的情况下，Tracer-LgBiT 与 FcγR-SmBiT 靶点结合，产生最大的发光信号。而在分析物样品中，未标记的 IgG 将与 Tracer-LgBiT 竞争性的与 FcγR 靶标结合，导致浓度依赖性的发光信号下降。

简单的“加样 - 读数”流程

简单快速地测定 Fc 受体结合亲和力

抗hCD20不同亚型与高亲和力FcγRI的差异性结合

(通过Lumit^® FcγRI结合免疫检测法测定)。

图示为抗hCD20的IgG1、IgG2、IgG3和IgG4与FcγRI相互作用的典型结合曲线（以归一化发光值表示）。无分析物时（0nM抗体）产生的最大生物发光信号定义为100%，各抗体浓度下的信号值以相对于该最大值的百分比表示。采用四参数逻辑回归模型（1/y²加权）拟合数据以确定IC₅₀值。

检测抗体糖基化对Fc结合的影响

Fc糖链去除对FcγRI结合能力的影响（采用Lumit^®FcγRI结合免疫检测法测定）。图示为天然人源IgG与经PNGase F去糖基化IgG的典型结合曲线。去糖基化处理条件：37℃过夜（IgG浓度4mg/ml；PNGase F用量为每20mg IgG添加1ml）。无分析物时（0nM IgG）获得的最大生物发光信号设定为100%，各IgG浓度下的信号值以相对于该最大值的百分比表示。采用四参数逻辑回归方程（1/y²加权）拟合数据，计算表观IC₅₀值。