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公司新闻/正文
使用HiBiT标签和IP-MS对内源性蛋白质相互作用进行定量分析
214 人阅读发布时间：2026-01-15 16:23
内源性蛋白质相互作用的定量分析仍然是蛋白质组学领域的重大挑战。传统的亲和标签和过表达系统通常会干扰天然蛋白质化学计量和动力学，导致产生掩盖生物学相关相互作用的假象。HiBiT标签是一种11个氨基酸的肽，通过与LgBiT进行生物发光酶互补，能够实现快速、超灵敏的定量检测标记蛋白。其微小尺寸特性使其成为CRISPR/Cas9介导内源性标记的理想工具，可保持生理表达水平。
为了将HiBiT的实用性扩展到定量分析之外，Promega开发了高亲和力的Anti-HiBiT单克隆抗体和Anti-HiBiT Magne®磁珠，用于免疫沉淀和质谱分析。
技术优势：
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HiBiT标签能够对内源性水平表达的蛋白质进行快速、灵敏的检测，最大限度地减少过表达假象。
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高亲和力Anti-HiBiT单克隆抗体可稳健地捕获HiBiT标记的靶标及其结合伴侣，即使在低丰度下也是如此。
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Anti-HiBiT Magne®磁珠简化了免疫沉淀工作流程，适用于手动和自动化的IP-MS应用。
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该集成工作流程结合了定量生物发光检测和高特异性免疫捕获，以实现精确的相互作用分析。
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为绘制内源性相互作用组和研究动态蛋白质网络提供了一种可扩展、高通量的方法。
HiBiT实现内源性蛋白质的标记
NanoLuc®二元分裂萤光素酶系统
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高亲和力相互作用（KD = 0.7 nM）。
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HiBiT/LgBiT互补产生明亮的生物发光信号。
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HiBiT是通过CRISPR/Cas9基因编辑标记内源性表达蛋白、减少过表达假象的理想选择。
CRISPR插入HiBiT标签
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HiBiT的小尺寸允许使用DNA寡核苷酸模板进行基因编辑，从而产生更高效率的敲入。
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使用LgBiT进行的生物发光检测法便于筛选分离编辑后的克隆。
HiBiT标记蛋白定量检测
通过生物发光HiBiT裂解检测法实现快速简便的蛋白质定量。
使用HiBiT标准曲线将RLU转换为蛋白质浓度。
HiBiT标记蛋白免疫沉淀
免疫沉淀策略
利用CRISPR敲入细胞株表达的HiBiT标签靶蛋白可通过Anti-HiBiT单克隆抗体进行免疫沉淀。
捕获HiBiT蛋白质复合物
使用新品Anti-HiBiT Magne®磁珠捕获含HiBiT的蛋白质复合物。
PROTAC浓度越高，导致更多三元复合物形成。
用于IP-MS的低丰度HiBiT标记蛋白的捕获
与亲本HeLa细胞裂解物相比，在RELA-HiBiT HeLa CRISPR敲入细胞裂解物的Anti-HiBiT免疫沉淀洗脱液中，富集了RELA及NF-κB转录因子复合物的其他成员。
EGFR相互作用及翻译后修饰的质谱分析
通过质谱检测EGFR Y1172磷酸化
总结
这种集成的工作流程允许定量捕获HiBiT标记的蛋白质及其相互作用物，从而能够详细绘制内源性蛋白质复合物、翻译后修饰和信号网络动力学的图谱。在此，我们展示了如何将生物发光定量分析与基于抗体的富集相结合，促进在生理水平上对蛋白质-蛋白质相互作用进行稳健、可重复的分析。