技术 | 实时活力动态监测赋能药物有效性/毒性评估新维度

• 先导化合物的起效时相如何？

• 联合用药是否产生协同效应？

• 药物在3D模型中的渗透动力学怎样？

1.研究重点是“动力学过程”

需要了解一种药物或处理因素对细胞的作用是快速起效还是缓慢发生的。

2.研究对象是“3D模型”

3.从“珍贵样本”中获取多个时间点的数据

当细胞样本非常珍贵或难得（如原代细胞、患者来源的类器官），终点裂解法因为多次取样而浪费样本。

4.进行超过72小时超长时间实验

进行慢性毒性试验或长期药效观察。

市面上大多数的实时监测都需要专用且昂贵的设备，在实验室仅配备多功能酶标仪且无需形态学分析时，Promega的 RealTime-Glo™ MT Cell Viability是进行实时活力检测的最佳选择。

• 公认的细胞活力指标：检测细胞还原电位继而反映出细胞的代谢情况及数量；

• 实时监测：对细胞无毒，可在同一孔中72小时至更长时间实时监测细胞活力；

• 生物发光法更高灵敏度：比传统比色法或荧光法拥有更大的S/B和高灵敏度；

• 样本可用于下游检测：无需裂解细胞，样本可用于下游更多检测，如RNA提取、RT-qPCR、报告基因、其他Promega细胞活力和毒性检测等；

• 完美兼容3D类器官等模型：其良好的渗透性和实时检测的模式完美适配3D培养模型；

• 仅需具备发光检测模式的读板仪；

• 高通量药物筛选理想工具：适配 96/384/1536孔板，操作简单，仅需单次加样。

上图. 检测可以灵活设置，可以在细胞铺板时、添加待测化合物时或在检测的任意一个需要测量细胞活力的时间点将试剂加入到细胞中，建立实时细胞活力测量模式；也可设置终点法检测模式。仅需具有发光检测功能的多功能读板仪。

特异性底物前体能够被活细胞还原而转化为NanoLuc^® Luciferase底物并从细胞内扩散到周围的细胞培养基中，与NanoLuc^® Luciferase快速反应而产生发光信号。信号强度与活细胞数量呈正相关。

上图.使用RealTime-Glo™ MT Cell Viability Assay 实时监测药物EC50。A549 细胞500 个/ 孔铺于384 孔板中，每孔40μl 细胞培养基中含有2 X RealTime-Glo™ 试剂。等体积2 X bortezomib 加入细胞。72h 监测发光信号。